Приглашаем посетить сайт
ГОЛЬДЖИ МЕТОД
ГОЛЬДЖИ МЕТОД окраски гист. пре-' паратов состоит в том, что небольшой кусочек ткани кладется сначала или в чистый паствор двухромовокислого калия или в одну из смесей, содержащих эту соль, а затем в раствор азотнокислого серебра или сулемы. На структурных элементах выпадает при этом осадок из хромовокислого серебра или ртути, и получается сплошное импрегни-рование их (силуэты клеток и волокна). При- меняется Г. м. для выявления нервных клеток и отростков, глиозных клеток, осевых отростков с колятералями и концевыми окончаниями, далее для воспроизведения границ между эпителиальными клетками, для выявления секреторных канальцев, желчных ка-пиляров и пр. Теория метода тщательно разработана и касается разнообразных вопросов. Получаемый осадок не просто состоит из Ag2Cr04, а представляет собой сложное белково-хром-серебр'яное соединение. Динамика процесса выяснена Гофманом и Лизегангом (F. В. Hofmann, Lie-segang). Теория последнего основывается на особенностях циркуляции и перераспределения частиц К2Сг207 и AgN03, а также Ag2Cr04 в коллоидной среде и на том влиянии, которое оказывают при этом на образование осадка кислоты и аммиачные соли тканевых структурных элементов. Почему из целой группы одинаковых нервных клеток импрегнируются только нек-рые, объясняется тем, что осадки легче выпадают на тех структурных элементах, к-рые начали импрегнироваться раньше. Было высказано также мнение, что отложение осадков идет по поверхности клеток и волокон в лимф. пространствах, а не в них самих, но это не соответствует фактам. Техника метода. Г. предложил несколько модификаций, к-рые приводятся ниже в порядке употребительности.-А. С к о-рый серебряный метод Г. 1) Очень небольшой и тонкий кусочек свежего материала, предпочтительно от эмбриона или новорожденного, кладется в смесь: 3%-ного Kal. bichrom.-8 частей, 1%-ной Ac. osmici- 2 ч. Держать в темноте 2-8 дней. Предварительно кусочек обсушить промокательной бумагой и в жидкости положить тоже на фильтровальную бумагу. Продолжительность фиксации: для невроглии-2-3 дня, для нервных клеток-3-5 дней, для нервных волокон-6-9 дней.Лучше делать пробные срезы через 2-3 дня. 2) Быстро промыть в дестил. воде или в бывшем в употреблении растворе серебра (1/1%-ный Arg. nitr.). 3) 0,6-1%-ный Arg. nitr.-2-6 дней. Менять жидкость, когда желтеет. 4) Резать, зажав кусок в печеночной ткани, или на замораживающем микротоме или после быстрого заключения в целлоидин (30 минут), толстые срезы-в 50-100 //. 5) Абсолютный спирт, бергамотовое масло, канадский бальзам или даммаровая смола в ксилоле без покровного стекла или же восходящие спирты до 96%, креозот (коротко), бальзам или смола. Дать затвердеть в воздухе.-Б. Длительный серебряный метод Г. 1) Фиксация в Мюллеровской жидкости на холоду 3 мес, затем в тепле-1 мес. (в темной склянке) или для ускорения-в растворе Kalii bichr.,-с 2%-ного постепенно дойти до 5%-ного. 2) Дестилиров. вода (коротко). 3)0,5-1%-ный Arg. nitr. и далее, как в первой модификации. Можно скомбинировать обе модификации: сначала держать в Мюллеровской жидкости, а потом в смеси двухромовокислого калия с осмиевой кислотой.- В. Су л ем"овый метод Г. 1) Мюллеров-ская жидкость-3-4 недели. 2) 1/4-1%-ный водный раствор сулемы, от недели до 1-2 ме- сяцев. Переменить жидкость в первый день и затем снова, когда начнет желтеть. 3)Спир-ты восходящей крепости, целлоидин, срезы. 4) Дестилированная вода. 5) Срезы на 1- 2 минуты класть в жидкость: a) Natrium hyposulfuricum 175 г, квасцы 20 г, Ammonium sulphocyanid. 10 г, поваренная соль 40 г, дестилированная вода-1.000 куб. см. Дать постоять 8 дней, потом фильтровать. б) Хромистое золото 1 г, дестилированная вода-100 куб. см. Взять 60 частей первой жидкости и 7 второй. Срезы делаются черными. 6) Основательная промывка. 7) Докрас-ка кармином. 8) Вода. 9) Абсолютный спирт, ксилол, заключение в бальзам. Из модификаций Г. м. лучшая - Кокса (Сох).-М етод Кокса. 1) Фиксация и импрегнация в жидкости: а)5%-ного Kalii bi-chrom. 20 з, 5%-ной сулемы-20 г, дест. воды 40 куб. см; б) 5%-ного Kalii chrom.-16 г. Во избежание осадка сначала приготовить жидкость а (можно с подогреванием) и прибавить Kalium chromicum (б). Кусочки (можно и крупные) положить на 2 и более месяца. Летом держать короче. 2) Срезы на замораживающем микротоме. 3) Срезы сбрасываются в 5%-ный Natr. carbon, на 1-2 часа или в насыщенный Natr. suliurosum, где происходит восстановление. 4) Вода; быстро на стекле-абсол. спирт, масло; осторожно фильтровальная бумага. 5) Заключение в лак: зандарак 75 г, камфора 15 г, терпентин 30 г, лавандовое масло 22,5 г, абсолютный спирт 75 г, касторовое масло 5-10 капель. На затвердевающий слой лака капнуть касторового масла, прикрыть покровным стеклом и выдавить излишнее количество.-П оказания к м е т о д у.* Г. м. не элективен, дает осадки, и все же в нек-рых отношениях- для выяснения связи невронов, для обнаружения секреторных канальцев-он почти совершенно незаменим. Из приведенных модификаций длительная-более старая, скорая же-более поздняя и усовершенствованная. Последняя имеет преимущества перед первой. Точно так же ртутные модификации имеют тенденцию вытеснять серебряные. Но в практической деятельности следует пользоваться однако различными модификациями метода Гольджи в зависимости от свойств исследуемого объекта.
Лит.: Kallios В., Golgische Methode (En-zyklopadie der mikroskop. Technik, hrsg. v. R. Krau-se, B. II, B.-Wien, 1926, лит.).
П. Снесарев.